Clinical Cytology in Russia: A Report

by I.P. Shabalova, Department of Clinical Laboratory Diagnostics, Russian Medical Academy of Postgraduate Education; Association of Clinical Cytology of Russia; Russian Scientific and Practical Society of Specialists on Clinical Laboratory Medicine, and V.V. Dolgov, Department of Clinical Laboratory Diagnostics, Russian Medical Academy of Postgraduate Education; Russian Scientific and Practical Society of Specialists on Clinical Laboratory Medicine

Clinical Cytology is officially the part (subspeciality) of Laboratory Medicine in Russia. In our country each year more than 48.5 million cytological analyses are performed in 2,830 of 7,007 clinical diagnostic laboratories and in 242 specialized cytological laboratories. The ratio of the specialists with high education: middle education is 1:4,4. The ratio of medical doctors: biologists with high education is 3:5. Medical doctors (MD) of Clinical Laboratory Diagnostic (after six years of high medical education and two years of ordinatura – specialization on clinical laboratory diagnostics or anatomopathology) are certified to work in laboratory medicine in Russia. Three categories of middle medical staff work in laboratories as well. Biologists (after University biological education and 500 hours of specialization on clinical laboratory diagnostics including cytopathology) can work in laboratory as biologists of clinical laboratory diagnostics. 

...

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КРИВЫХ РОСТА БАКТЕРИЙ В СЫВОРОТКЕ ДЛЯ ОЦЕНКИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ЗАЩИТЫ У БОЛЬНЫХ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ

Е.Н.Шахбазова, Н.И.Галиуллин, Ф.И.Нагимова, Л.Н.Килина, Е.Ю.Котляр, Е.Н.Жадько (ГАУЗ Республиканский центр по профилактике и борьбе со СПИД Республики Татарстан), И.М.Хаертынова (ГБОУДПО КГМА Минсоцразвития России), И.М. Чепурная (Представительство Эрба Лахема в РФ )

Введение

Снижение иммунитета у ВИЧ-инфицированных паци­ентов часто приводит к более тяжелому течению сопутствующих бактериальных инфекций. Своевременная и точная оценка степени ослабления неспецифического иммуно­дефицита предоставила бы возможность профилактики подоб­ных осложнений.

Материалы и методы

Для выявления изменений бактерицидной активности сыво­ротки крови пациентов с ВИЧ-инфекцией в отношении услов­но-патогенных бактерий использовали метод подавления анти­инфекционной резистентности (ПАИР). Тестовые культуры (музейные штаммы 25923 S. aureus, 25922 E. coli и 27853 P. аeruginosa) вносили в титре 104...105 КОЕ/мл в жидкие питательные среды с сывороткой крови пациентов. Кривые микробного роста получали посредством измерения оптичес­кой плотности в ячейках планшета через равные промежутки времени с помощью фотометра «iEMS-MF» (Termo-Labsystems, Финляндия) в соответствии с методиками «Суспензии» и «ПАИР» (пакет программ «Микроб-Автомат» (Россия). Приращение оптической плотности в ячейке с инокулированной питательной средой свидетельствует о размножении в ней микро­организмов. Высокий уровень корреляции оптической плотности с количеством бактериальных клеток позволяет опосредованно называть «кривую роста оптической плотности» «кривой мик­робного роста». Ее представляют в виде графиков приращения оптической плотности на каждом шаге измерения. На основании сопоставления кривых микробного роста бакте­рий в питательных средах с пробами сыворотки крови и без нее программа позволяет определить степень подавления сыворот­ками роста бактерий.

Исследовали сыворотку крови, взятую с соблюдением правил асептики у 94 пациентов с ВИЧ-инфекцией, находящихся на разных стадиях болезни: на III — 21, IVА — 48, IVБ — 17 и IVВ — 8 чел. Стадии ВИЧ-инфекции определяли согласно классификации В.И. Покровского (2001 г.):

I — бессимптомное носительство;

II — наличие первичных проявлений:

А — бессимптомная ВИЧ-инфекция,

Б — острая инфекция без вторичных прояв­лений,

В — острая инфекция со вторичными проявлениями;

III — субклиническая;

IV — наличие вторичных заболеваний:

А — потеря массы тела менее, чем на 10%, грибковые, бактериальные, вирус­ные поражения кожи и слизистых оболочек;

Б — потеря массы тела более, чем на 10%, стойкие грибковые, бактери­альные, вирусные поражения кожи и слизистых оболочек, внутренних органов, туберкулез, протозойные инфекции;

В — генерализованные инфекции, поражения центральной нервной системы.

Контрольную группу составили 23 здоровых человека. Сыворотку получали в асептических условиях.

Результаты

...

ЭФФЕКТИВНЫЙ ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К ВОЗБУДИТЕЛЮ СТОЛБНЯКА

А.Н. Радчикова, ООО «ГЕМ», Москва

Столбняк — тяжелое острое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением нервной системы и про­являющееся тоническими и клоническими судорогами скелетной мускулатуры. Впервые его описал Гиппократ, причем при трагических обстоятельствах: от столбняка умер его сын. Возбудитель болезни, анаэробная бактерия Cl. tetani, является компонентом микрофлоры кишечника человека и многих видов теплокровных животных. С фекалиями она попадает в почву, в которой способна сохраняться годами вследствие обра­зования устойчивых к факторам внешней среды спор. Попав в травмированные ткани человека, споры в условиях отсутс­твия кислорода вегетируют. Образующиеся из них бактерии продуцируют экзотоксины — тетаноспазмин и тетанолизин. Тетанолизин проявляет выраженную гемолитическую актив­ность, которую ингибирует высвобождающийся из разрушен­ных им эритроцитов холестерин. Тетаноспазмин значительно опаснее — это сильнейший яд, уступающий лишь токсинам возбудителей ботулизма и дифтерии. Этот токсин ингибирует функции синапсов и блокирует секреторную активность фаго­цитов, что лежит в основе патогенеза болезни. Известный отечественный хирург Н. Бредов считал, что «после бешенства и чумы нет болезни более смертельной, чем столб­няк». Действительно, при несвоевременном обращении за меди­цинской помощью умирает 40...50% заболевших им людей. Представление о том, что эту инфекцию регистрируют только в Азии, Африке и Латинской Америке соответствует действитель­ности только отчасти: заболеваемость столбняком возрастает по мере приближения к экватору, но возбудитель распространен повсеместно и вызывает в регионах с умеренным и холодным климатом, (и Россия в этом отношении не относится к числу исключений) спорадические случаи столбняка. Обычно люди заболевают столбняком в период с апреля по октябрь.

..

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ПАРАЛЛЕЛИ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ ВИРУСОМ ЭПШТЕЙНА-БАРР, В ГРУППАХ ВЫСОКОГО РИСКА

Т.И. Долгих, Е.Ю. Минакова, М.В. Шелев,
Омская государственная медицинская академия

Целью исследования явилось изучение вклада вируса Эпштейна-Барр   (ВЭБ)   в   формирование   патоло­гии.  Обследовано 306 пациента (средний возраст 25,6 ± 5,8 год), в том числе:

I  группа —  126 пациентов с инфекционным синдромом (гепатоспленомегалия,   гепатит   неясной   этиологии,   дли­тельный субфебрилитет, лимфаденопатии);

II  группа — 85 пациентов с рецидивирующими ангинами;

III  группа — 95 женщин с внутриутробной гибелью эмб­риона/плода.

...

ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ВОСТРЕБОВАННОСТЬ НЕКОТОРЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАЮЩИХСЯ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ (ИППП)

Е.В. Горелова, А.Г. Бойцов (ГБОУ ВПО Северо-Западный ГМУ им. И.И. Мечникова, г. Санкт-Петербург), Т.В. Домакова,  В.С. Щеглов (ЗАО «Ситилаб», г. Санкт-Петербург)

Хламидийную инфекцию, трихомониаз, микоплазмоз и уреаплазмоз в лаборатории «Ситилаб» диагностируют 3 методами: ПЦР, культуральным и серологическим. ПЦР   в  режиме  реального  времени  проводим  с  приме­нением  амплификатора   Rotor-Gene   3000   (Corbett   Res., Австралия).

Для изоляции хламидий из клинического материала пользу­емся перевиваемой линией клеток McCoy. Chl. trachomatis выявляем в зараженной культуре клеток после ее обработки преднизолоном в реакции иммунофлюоресценции. Выделение микоплазм и уреаплазм проводим в тест-системе «Mycoplasma IST-2» (bioMerieux, Франция), а трихомонад — в тест-системе «Вагикульт» (Orion Diagnostica, Финляндия). Серологическую диагностику инфекций осуществляем в имму-ноферментном тесте (ИФА) с помощью реагентов ЗАО Вектор-Бест» (Россия).

В 2009 г. в лабораторию поступило 39 165 проб для исключе­ния перечисленных выше ИППП. Наиболее востребованным (80,7 ± 0,4%) лечащими врачами методом диагностики оказа­лась ПЦР. К изоляции возбудителей прибегли в 10,44 ± 0,3%, а к серологической диагностикой — в 8,84 ± 0,28% случаев. Культуральный метод обнаружения хламидий использова­ли по назначению лечащих врачей при обследовании 408, ПЦР — 11 076, ИФА — 2 707 чел. В ПЦР частота обнаруже­ния хламидий у пациентов (вне зависимости от пола) составила 5,2 ± 0,4%, но изолировать Chl. trachomatis в культуре клеток удалось из 9,3 ± 3,0% исследованных проб. Вероятно, причина этого состоит не в более низкой чувствительности ПЦР, а в том, что врачи нередко назначали изоляцию хламидий после их обнаружения у пациентов в ПЦР для подтверждения чувстви­тельности возбудителей к применяемым ими антибактериаль­ным препаратам. Устойчивость Chl. trachomatis к последним встречается редко, что ставит под сомнение целесообразность такой проверки.

Серологическую диагностику хламидийной инфекции осущест­вляли выявлением в ИФА специфических IgA- и IgG-антител. Из 2 707 исследованных сывороток IgG-антитела обнаружили в 355 (13,11 ± 1,3%), в т.ч. в диагностически значимых титрах в 344 (12,71 ± 1,28%) пробах. Наличие IgA в титре >1 : 8 рас­ценивали как признак обострения хронического процесса или острой хламидийной инфекции. При исследовании 2 413 сыво­роток IgA-антитела в диагностическом титре обнаружили в 138 (5,72 ± 0,94%) случаях.

...

ПРИМЕНЕНИЕ РОЗ-БЕНГАЛ ТЕСТА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЧЕЛОВЕКА

Р. Диаз, И. Морийон (Университет Наварры (Испания)), А. Казанова,  Дж. Ариза (Университет Барселоны (Испания))

Введение

Бруцеллез (Бр) — высококонтагиозный зооантропо-ноз, вызываемый грамотрицательными бактериями рода Brucella. Три так называемые «гладкие (S) бруцеллы» (B. abortus, B. suis и B. melitensis) поражают преимущественно крупный рогатый скот, свиней и коз, соответственно. В боль­шинстве случаев Бр человека именно эти виды животных слу­жат источником инфекции. В Средиземноморье и ряде других регионов мира инцидентность Бр у населения очень высока. Однако, из-за непатогномоничности симптоматики многие случаи инфекции остаются нераспознанными. По данным медицинских служб разных стран инцидентность Бр колеблет­ся в широких пределах — от 0,01 до 200 на 100 тыс. чел.. Для постановки окончательного диагноза на Бр необходимы лабораторные методы диагностики. Изоляция бруцелл предо­ставляет неопровержимые доказательства их этиологической роли, но она дорога и опасна. Проведение серологических методов диагностики Бр значительно проще. Мишенью для антител к S-бруцеллам служит преимущественно полисахарид-ный антиген, являющийся компонентом липополисахарида клеточной стенки этих бактерий. Для гуморального иммуни­тета характерно изменение в процессе инфекции титров имму­ноглобулинов разных классов. На ее острой фазе в сыворотке крови появляются IgM-антитела, а в последующем их титр пос­тепенно снижается; на хронической стадии превалируют IgG- и IgA-антитела. Более того, титр выявляемых в тесте Кумбса неаг­глютинирующих антител по мере прогрессирования инфекции становится выше титра агглютинирующих антител, для оценки которого пользуются пробирочной реакцией агглютинации (ПРА). С целью повышения достоверности результатов сыво­ротку крови обычно одновременно исследуют в ПРА и тесте Кумбса. В настоящее время для диагностики Бр человека также применяют другие методы: иммунохроматографический (на IgM- и IgG-антитела), флюоресцентный поляризационый, разные варианты иммуноферментного анализа (ИФА) и тест с захватом антител Brucellacapt. Поскольку большинством из них можно пользовать только в хорошо оснащенных лаборато­риях, и они требуют значительных финансовых затрат, то для рутинной диагностики в эндемичных по Бр регионах они часто бывают непригодными.

Роз-бенгал тест (РБТ) — реакция агглютинации, проводимая посредством смешивания на стекле сывороток с суспен­зией окрашенных клеток B. abortus. Его проводят при pH 3,6...3,7. Это очень простой тест, который мог бы стать для маленьких лабораторий оптимальным решением проблемы серологической диагностики Бр людей. Однако, ВОЗ реко­мендует подкреплять показания РБТ результатами других диагностических тестов. Основанием для этого стала информация о низкой чувствительности РБТ, с которой исследователи столкнулись при диагностике преимуществен­но хронических случаев инфекции, и пониженной специфичности его показаний в эндемичных по Бр районах. Задача настоящей работы состояла в оценке диагностической ценности РБТ.

Схема эксперимента и результаты исследований

...

ОСОБЕННОСТИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОГО ТИФА

Л.А. Кафтырева, С.А. Егорова,
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
Референс-центр по мониторингу за возбудителями брюшного тифа

Брюшной тиф (БТ) — кишечный антропоноз, способ­ный к широкому эпидемическому распространению. Его возбудитель (серовар S. Typhi) принадлежит к виду S. enterica рода Salmonella. У S. Typhi имеются сомати­ческие (О) антигены 1, 9, 12, Vi и жгутиковый антиген Нd. Заболевание характеризуется язвенным поражением лимфа­тической системы тонкой кишки, бактериемией, лихорадкой, циклическим течением с выраженной интоксикацией, розеолезной кожной сыпью, увеличением печени и селезенки. Примерно у 1% заболевших тифом изъязвляются пейеровые бляшки подвздошной кишки, что ведет к кишечному кровоте­чению и прободению кишечника. В отличие от других острых кишечных инфекций после перенесенного заболевания у 5% пациентов может формироваться хроническое бактерионоси­тельство, которое сопровождается выделением возбудителя (с фекалиями и мочой) и наличием в сыворотке крови имму­ноглобулинов (антител) к Vi-антигену возбудителя. Последний признак считают индикатором хронической формы инфекции. Бактерионосители опасны как источники возбудителя. Современной особенностью эпидемиологии БТ является рез­кое увеличение частоты завоза (заноса) инфекции с эндемичных по этому заболеванию территорий, стран ближнего и дальнего зарубежья, а также заражение жителей России при выезде в эти страны и в процессе миграции внутри страны. Кроме того, лиц без определенного места жительства составляют обширный контингент повышенного эпидемиологического риска по БТ. Применение антимикробных препаратов для этиотропной терапии БТ и паратифов позволило, с одной стороны, снизить летальность с 10...20% до <1%, но осложнило лабораторную диагностику, проводимую после начала антибиотикотерапии. БТ диагностируют на основании анализа симптоматики и результатов комплекса лабораторных исследований, вклю­чающих классические бактериологические и серологический методы. Бактериологическая диагностика имеет приоритетное значение, т.к. предоставляет наиболее полную информацию о биологических свойствах возбудителя, включая его чувстви­тельность к антибактериальным препаратам. Серологические методы обеспечивают ретроспективную диа­гностику БТ на основании выявления в сыворотке крови спе­цифических антител к антигенам S. Typhi (1, 9, 12 и Vi). Их применяют для:

• подтверждения клинического диагноза при отрицательном результате бактериологического исследования крови, фека­лий и другого материала;

...

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ХРОМОГЕННОЙ СРЕДЫ
ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПАТОГЕНОВ МОЧЕВЫХ ПУТЕЙ

Л.Г. Боронина, Е.В. Саматова, Кукушкина М.П., С.М. Блинова, С. С. Устюгова,
ГУЗ «Областная детская клиническая больница №1»,
ГБОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Екатеринбург

Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) относятся к самым распространенным инфекционным заболевани­ям, которые требует значительных финансовых затрат. В США на ИМП приходится более 7 млн. визитов к врачу в год, из них более 2 млн. связаны с циститом. Около 15% всех амбулаторно назначаемых антибиотиков, общей стоимостью более 1 млрд. долларов в год, выписываются по поводу ИМП. Более того, прямые и непрямые затраты на внебольничные ИМП превышают 1,6 млрд. долларов США в год. ИМП являются причиной более 100 000 госпитализаций в год, преимущественно по поводу пиелонефрита. На их долю также приходится как минимум 40% от всех нозокомиальных инфекций, которые в большинстве случаев обусловлены кате­теризацией мочевого пузыря. У 25% пациентов с установлен­ным >7 дней мочевым катетером развивается нозокомиальная бактериурия, при этом ежедневный риск её развития состав­ляет 5%. Более того, возбудители инфекций подвергаются воздействию факторов внутрибольничной среды, в том числе «селективному давлению» антибиотиков и антисептиков. ИМП также широко распространены и в детском возрасте (около 18 на 1 000 детского населения). Начало заболевания часто приходится на первый год жизни и, как правило, про­текает в виде острого пиелонефрита. В периоде новорожден­ности ИМП преимущественно регистрируется у мальчиков (до 3%), затем к году происходит снижение их частоты до 1-2%. Заболеваемость ИМП у мальчиков в дошкольном воз­расте составляет не более 0,5%, а периоде пубертата — всего 0,1%. У девочек частота ИМП с возрастом увеличивается (на 1 году— 2,7%; в дошкольном возрасте — 4,7%; в школьном возрасте составляет от 1,2 до 1,9%). Лечение ИМП бывает успешным не у всех больных. В течение ближайших трех месяцев после первого эпизода ИМП рецидивирует у большей части пациентов, в связи с чем, нередко, требуется проведе­ние повторных курсов антибактериальной терапии. От того, насколько правильно выбрана стартовая антимикробная тера­пия ИМП, зависит в конечном итоге эффективность лечения и прогноз заболевания.

...

МЕТРОЛОГИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИН ВИТРО: ЕВРОПЕЙСКИЙ ПОДХОД

В.С. Антонов,
Зав. отделом ФГУ ВНИИИМТ Росздравнадзора, член рабочей группы Европейской Федер по Клинической Химии и Лабораторной Медицины по изменению Директивы 98/79/ЕС по медицинским изделиям для диагностики ин витро

В рыночной экономике одной из важнейших функций государства является регулирование в сфере обеспече­ния точности результатов измерений в тех областях, где точность измерений существенно затрагивает интересы общества — здравоохранение, защита окружающей среды, защита прав потребителей, межгосударственные отношения и др.

В 2004 г. после длительного обсуждения в Евросоюзе была принята Директива 2004/22/ЕС о средствах измерений, устанавливающая метрологические требования, правила допуска на рынок и метрологического контроля средств измерений.

В Евросоюзе с целью регулирования в сфере измерений используются следующие две категории измерительных средств:

•          «device with measuring function» — изделие с измерительной функцией — это самое широкое понятие, которое охваты­вает практически все измерительные средства;

•          «measuring instrument» — средство измерений — это только те изделия с измерительной функцией, которые подпадают под действие Директивы 2004/22/ЕС.

В статье 1 указывается 10 групп изделий с измерительной фун­кцией, на которые распространяется действие Директивы:

• измерители расхода воды,
• измерители расхода газа и преобразователи объема,
• измерители расхода активной электроэнергии,
• измерители тепла,
• измерительные системы для непрерывного измерения жид­костей, отличных от воды,
• автоматические весы,
• таксометры,
• материальные меры (длина, меры для розлива),
• измерители размеров
• анализаторы выхлопных газов.

...

ПАПП-А/ СВ. БЕТАХГЧ ДВОЙНОЙ DBS НАБОР
ДЛЯ ПЕРВОГО ТРИМЕСТРА БЕРЕМЕННОСТИ БЕЗ СЫВОРОТКИ

Высокоточный анализ на ПАПП-А и свободный бета ХГЧ для пренатального скрининга в первом триместре теперь можно проводить на сухих пятнах крови

Расширяя границы пренатального скрининга

Исследования на ПАПП-А и свободную субъединицу бета ХГЧ для пренатального скрининга в первом триместре теперь можно проводить на сухих пятнах крови (DBS). Имея точность, специфичность и чувствительность, анало­гичные анализам ДЕЛФИЯ для первого триместра, прово­димым в сыворотке, DELFIA/AutoDELFIA ПАПП-А/свободный бета ХГЧ двойной DBS набор позволяет расширить

границы пренатального скрининга, сэкономить на доставке образцов и предоставляет клинически эффективный спо­соб сбора, транспортировки и хранения образцов крови беременных на фильтровальных бланках в областях, где пренатальный скрининг в сыворотке матери ограничен гео­графией местности.

Преаналитический этап: ошибки при сборе сыворотки, некор­ректное обращение с образцами, транспортировка по «холодовой» цепи без строгого контроля — может исказить результаты анализа. Стабилизация белков на матрице фильтровальной бумаги обеспечивает лучшую сохранность образцов при значительно более низких затратах, по сравнению с транспорти­ровкой сыворотки, и увеличивает сроки хране­ния образцов.

Клинические значения DBS и сывороточных анализов в первом триместре аналогичны

Сбор образов крови пациенток на фильтро­вальную бумагу является клинически дока­занным практическим подходом к скринин­гу. На сегодняшний день NTD Laboratories, аккредитованная лаборатория PerkinElmer в Нью-Йорке, производит скрининг в пер­вом триместре для 85% женщин США. NTD протокол включает в себя анализ свободной субъединицы (3-ХГЧ, ПАПП-А и ультразву­ковое исследование и является стандартом в пренатальном скрининге для первого тримес­тра беременности. Биохимия выполняется на сухих пятнах крови.

...